- 上海滬崢生物科技有限公司
- 聯(lián)系人：李小姐
- 電話：021-20421762
- 傳真：021-68969289
- 郵箱：869248833@qq.com
- 地址：上海市，懿行路971弄
|
 |
 |
 |
 |
 |
- 品牌：滬崢生物
- 產(chǎn)地：國內(nèi)
- 型號：50T/盒
- 貨號：HXG459
- 價格： ￥2380/盒
- 發(fā)布日期： 2021-03-25
- 更新日期： 2024-12-06
| 產(chǎn)地 | 國內(nèi) |
| 品牌 | 滬崢生物 |
| 貨號 | HXG459 |
| 用途 | 僅用科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程， 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。
【使用方法】
1.樣品處理（樣本處理區(qū)）
樣本前處理：
取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
2.DNA 提取
DNA 的提取采用DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作。
2.1試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：
2.3步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號
1 1 cycle 95℃ 10min 否
2 40 cycles 94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
3結(jié)果分析判定
3.1結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果。
3.2判斷
a)檢測通道 Ct 值≤30，有 FAM 熒光信號檢出，并出現(xiàn)典型的擴增曲線，判斷樣品為陽性。
b)當(dāng) 30
4.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
a)空白對照：無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35，未出現(xiàn)典型的擴增曲線。
b)陰性對照：無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35，未出現(xiàn)典型的擴增曲線。
c)陽性對照：有 FAM 熒光信號檢出，并出現(xiàn)典型的擴增曲線，Ct 值＜30。
d)以上應(yīng)同時滿足，否則本次實驗無效。
【注意事項】
所有操作嚴(yán)格按照說明書進行；檢驗過程中，參照《GB/T 27403 實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品分子生物學(xué)檢測》的規(guī)定進行。
試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，混勻并短暫離心；
反應(yīng)液應(yīng)避光保存；
反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；
樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；
實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全 通則》進行處理。
